原代細(xì)胞的分離培養(yǎng)：

原代培養(yǎng)即直接從有機(jī)體取下細(xì)胞、組織或器官，讓它們?cè)隗w外維持與生長(zhǎng)。原代培養(yǎng)的特點(diǎn)是細(xì)胞或組織剛離開(kāi)機(jī)體，它們的生物性狀尚未發(fā)生很大的改變，在一定程度上可反映它們?cè)隗w內(nèi)的狀態(tài)，表現(xiàn)出來(lái)源組織或細(xì)胞的特性， 因此用于藥物實(shí)驗(yàn)，尤其是藥物對(duì)細(xì)胞活動(dòng)、結(jié)構(gòu)、代謝、有無(wú)毒性或殺傷作用等，是的工具。常用的原代培養(yǎng)法有組織塊培養(yǎng)法和消化培養(yǎng)法。

（一）組織塊培養(yǎng)法

許多實(shí)驗(yàn)室喜歡用組織塊培養(yǎng)法進(jìn)行原代培養(yǎng)，因?yàn)榉椒ê?jiǎn)單，細(xì)胞也較容易生長(zhǎng)。尤其是培養(yǎng)心肌，有時(shí)還可觀察到心肌組織塊搏動(dòng)。細(xì)胞從組織塊邊緣向外長(zhǎng)出并鋪滿培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶后， 即可進(jìn)行傳代。

1. 設(shè)備材料

培養(yǎng)箱、冰箱、超凈工作臺(tái)／無(wú)菌間、無(wú)菌吸管、離心管、酒精燈、試管架、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、消化液、基礎(chǔ)培養(yǎng)液、胎牛血清、Hanks 溶液、雙抗試液、剪刀、攝子、小燒杯。

2. 操作步驟

（1） 在無(wú)菌條件下，取待培養(yǎng)的組織適量，置入小燒杯中， 以適量Hanks 溶液清洗2~3 次，去掉組織塊表面的血污。

（2）用眼科剪將組織塊反復(fù)剪成0.5~ 1mm3的小塊。

（3）再用Hanks 溶液反復(fù)漂洗， 直至液體不混濁為止。等組織塊下沉，將燒杯傾斜，用小吸管盡量吸除Hanks 溶液。

（4）用含20%滅活血清及雙抗溶液(200U/ml、200μg/ml）的培養(yǎng)液再清洗，用吸管吸干后加入5ml 含20％血清的培養(yǎng)液。

（5）用彎頭吸管吸取組織小塊，均勻地置于培養(yǎng)皿內(nèi)表面，吸去多余的培養(yǎng)液，各組織小塊之間相距0.5cm 為宜。蓋好培養(yǎng)皿蓋，做好標(biāo)記， 置37°C 的CO2培養(yǎng)箱內(nèi)。

（6） 2~4h 后，于超凈工作臺(tái)中，緩緩地向培養(yǎng)皿中加入上述含20％血清及雙抗溶液( 100U/ml 及100μg/ml ）的培養(yǎng)液少量，以使組織塊浸沒(méi)在培養(yǎng)液中。

（7）輕輕地將培養(yǎng)皿及組織塊移至CO2 培養(yǎng)箱， 如無(wú)特殊情況，不必觀察。1~2 周后，可觀察到細(xì)胞從組織塊邊緣長(zhǎng)出，形成生長(zhǎng)暈。

（9） 一般說(shuō)來(lái)，若培養(yǎng)液無(wú)明顯改變， 1 周換液1 次即可。待細(xì)胞長(zhǎng)滿整個(gè)培養(yǎng)皿內(nèi)表面，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

兔膀胱上皮細(xì)胞

細(xì)胞基本屬性：

質(zhì)量檢測(cè)：廣譜角蛋白(PCK)免疫熒光染色為陽(yáng)性，純度高于 90%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等

產(chǎn)品規(guī)格：5x105cells/T25或1mL凍存管

培養(yǎng)基：兔膀胱上皮細(xì)胞培養(yǎng)基

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

換液頻率：每2-3天換液一次

消化液：0.25%

產(chǎn)品貨期現(xiàn)貨，1周左右

運(yùn)輸方式T25培養(yǎng)瓶/ 順豐快遞（包郵）

供應(yīng)限制僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動(dòng)物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用

背景介紹：

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠α-骨膠原交聯(lián)(αCTx)ELISA試劑盒 ，英文名： αCTx ELISA Kit

人鐵蛋白(FE)ELISA檢測(cè)試劑盒Humanferritin,FEELISAKit 96T/48T

大鼠甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)免疫試劑盒 Rat Alpha-fetoprotein,AFP ELISA Kit

英文名稱RatCXCL2/MIP-2ELISAKit大鼠CXCL2/MIP-2規(guī)格：96T/48T

考馬斯亮藍(lán)細(xì)胞繁殖與毒性定量檢測(cè)試劑盒500次

ELISAKitGKRP人葡萄糖激酶調(diào)節(jié)蛋白規(guī)格：48T/96T

植物(ETH)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Human ai parainfluenza virus IgM aibody (ai-PIV IgM) ELISA Kit 人抗副流感病毒IgM抗體(ai-PIV IgM)ELISA試劑盒

PorcineImmunoglobulinG,IgGELISAKit 豬免疫球蛋白G(IgG)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforAFUELISAKit大鼠αL巖藻糖苷酶規(guī)格：48T/96T

血液唾液酸(SA)比色法定量檢測(cè)試劑盒50次

MouseThyroid-Peroxidase,TPOELISAKit小鼠甲狀腺過(guò)氧化物酶(TPO)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

兔膀胱上皮細(xì)胞勻漿制作或抽提   Homogenate production or exaction

（皮膚骨骼肌腸肌肉等難勻特殊樣品）   (the skin and skeletal muscle and other hard uniform special sample)

超氧化物歧化酶（SOD）檢測(cè)   Superoxide dismase (SOD) detection

二（MDA）檢測(cè)   Malondialdehyde (MDA) detection

操作方法：

組織塊直接培養(yǎng)法（原代細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)）

材料與儀器

【動(dòng)物】選擇大約一半足孕時(shí)間的胚胎，10－13天齡胚胎含有最大數(shù)量的未分化的間質(zhì)細(xì)胞，成纖維細(xì)胞可從這些細(xì)胞衍生獲得。每組小鼠胚胎1個(gè)【實(shí)驗(yàn)材料】每組的超凈臺(tái)中有以下物品：1.50ml配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS)1瓶；100ml 0.25%瓶；PBS(-)1瓶2.100ml滅菌燒杯2個(gè)；3、50ml離心筒2個(gè)4、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)5、1ml，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè)6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊；7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；8、酒精燈1臺(tái)；

步驟

1) 胚胎的分離。適用哺乳動(dòng)物(倉(cāng)鼠、小鼠和大鼠)2)將1－2個(gè)胚胎轉(zhuǎn)移至一個(gè)小的無(wú)菌培養(yǎng)皿中，用新的無(wú)菌剪刀小心地絞碎胚胎，用PBS漂洗。3)在無(wú)菌狀態(tài)下，將絞碎的胚胎轉(zhuǎn)移于一50ml的無(wú)菌離心筒中,加入40ml 0.25％的無(wú)菌,用攪拌棒輕輕攪動(dòng)。4)在溫暖的環(huán)境中或置于37°C培養(yǎng)箱中輕輕搖動(dòng)15分鐘。5)讓存留的組織塊在重力作用下慢慢沉降，將含有懸浮細(xì)胞的液體轉(zhuǎn)移至一無(wú)菌50ml的離心管中，該管內(nèi)按照每10ml上清加入l ml小牛血清的比例加入牛血清以滅活,。6)加人新鮮溶液(見(jiàn)前述步驟)于含有殘留未消化組織塊的原來(lái)的50ml離心筒中，重復(fù)步驟4和5。7)離心混合的細(xì)胞懸液，1200r/rain，5分鐘，棄上清。8)用新鮮的無(wú)菌PBS重懸沉淀的細(xì)胞，按步驟7再次離心。9)用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞直至上清清亮為止。