細(xì)胞色素試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中細(xì)胞色素C(Cyt-C)水平。用純化的細(xì)胞色素C(Cyt-C)抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被單抗的微孔中依次加入細(xì)胞色素C(Cyt-C)，再與HRP標(biāo)記的細(xì)胞色素C(Cyt-C)抗原結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成黃色。顏色的深淺和樣品中的細(xì)胞色素C(Cyt-C)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中細(xì)胞色素C(Cyt-C)濃度。
細(xì)胞色素試劑盒對標(biāo)本處理：
1.只對試劑盒本身負(fù)責(zé)，不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé)，請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量，預(yù)留充足的樣本。
2.實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測標(biāo)本含量，如果標(biāo)本濃度過高，應(yīng)對標(biāo)本進(jìn)行稀釋，使稀釋后的標(biāo)本符合試劑盒的檢測范圍，計(jì)算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
3.若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中，建議進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其有效性，并注意留存樣本。
4.使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。
5.若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清，因該類樣本干擾因素較多，如：細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞數(shù)量、采樣時間等，所以可能存在檢測不出的情況。
6.某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白，可能因?yàn)榕c本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配，而不被檢測出。
7.建議使用新鮮樣本，保存時間過長可能會存在蛋白降解或變性導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。
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