青海發(fā)光桿菌的分離提取
1.變性與等電點(diǎn)選擇性沉淀：取新鮮蛋清用1%NaCl-0.05mol/LHCl 溶液攪拌稀釋，加20%HAc 調(diào)至pH4.6，3000r/min 離心10min，收集濾液并記錄體積，留樣2mL(Ⅰ)待分析。將濾液置于沸水浴使3min 內(nèi)迅速升溫至75℃，用流動(dòng)水速冷后，3000r/min 離心20min，收集上清液，紀(jì)錄體積，并留樣2mL(Ⅱ)待分析。
2.丙烯酸處理：將所得清液(pH6.0左右)中滴加10%聚丙烯酸(用量為清液體積的1/4)，慢速攪拌，當(dāng)凝聚物出現(xiàn)后，靜置30min 使凝聚物粘附于容器底部。傾去上清液，加入蒸餾水約1mL，并滴加少量0.5mol/LNa2CO3，使沉淀溶解，此時(shí)溶液pH6左右。攪拌條件下向溶液中滴加500g/LCaCl2(體積為聚丙烯酸量的1/12.5)，生成的沉淀擠壓干后棄去。如所得溶液不夠澄清，可以進(jìn)行離心或簡(jiǎn)單過(guò)濾，并用少量水洗滌濾紙。收集濾液于刻度試管，記錄體積，留樣0.5mL(Ⅲ)待分析。
3.Sephadex G-50 柱層析
(1)裝柱：稱取15g Sephadex G-50，加入300mL 蒸餾水溶脹6小時(shí)以上，置熱水浴中加熱除去氣泡，冷卻后裝入玻璃層析柱。用6g/LNaCl 溶液200mL 平衡層析柱。
(2)上樣：向樣液中加入固體NaCl 使終濃度為50g/L，上樣時(shí)先吸去層析柱凝膠面上的溶液，再沿管壁滴加樣品，樣品量不宜超過(guò)10mL。加完后打開(kāi)層析柱出口，讓樣品均勻流入凝膠內(nèi)。
(3)洗脫：樣品流完后，先分次加入少量6g/LNaCl 洗脫液洗下柱壁上的樣品，然后接通蠕動(dòng)泵，繼續(xù)6g/LNaCl 洗脫，調(diào)節(jié)操作壓力使流速控制在7~8mL/10min，部分收集器收集，10min 一管，共收集200mL 左右。
(4)分析：紀(jì)錄各管體積，紫外光吸收法測(cè)定各管中蛋白質(zhì)濃度。合并含有蛋白質(zhì)的收集管，草酸鑒定Ca2+ ，留樣(Ⅳ)待分析。
4.乙二醇濃縮：青海發(fā)光桿菌將洗脫液放入透析袋，外面裹以聚乙二醇，置于加蓋容器中。當(dāng)酶液水分被聚乙二醇吸收而濃縮至5mL 左右時(shí)，用蒸餾水洗去透析膜外的聚乙二醇，倒出濃縮液，記錄體積，留樣0.5mL(Ⅴ)待分析。
250克    Anaerobic Broth    用于專性厭氧菌培養(yǎng)    GAM肉湯
250    Thiosulfate Citrate Bile Salts Sucrose Agar    用于致病性弧菌的選擇性分離（GB、SN標(biāo)準(zhǔn)）    TCBS瓊脂    
250    EEM medium    用于致病性大腸桿菌的增菌培養(yǎng)和腸桿菌的增菌培養(yǎng)(Japan方法)    EEM培養(yǎng)基
250克    Dextrose Semisolid Medium    用于志賀氏菌的生化試驗(yàn)    葡萄糖半固體發(fā)酵管
250    Ammonium Dextrose Medium    用于志賀氏菌的葡萄糖銨試驗(yàn)（GB標(biāo)準(zhǔn)）    葡萄糖銨培養(yǎng)基  
250    Dextrose Semisolid Medium    用于志賀氏菌的復(fù)合生化試驗(yàn)（GB標(biāo)準(zhǔn)）    葡萄糖半固體培養(yǎng)基   
250克    MS Medium    用于植物組織培養(yǎng)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基    MS培養(yǎng)基
青海發(fā)光桿菌