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    細(xì)胞培養(yǎng)初認(rèn)識

    點(diǎn)擊次數(shù):388  更新時間:2024-03-28
    什么是細(xì)胞培養(yǎng)?細(xì)胞培養(yǎng)是指將細(xì)胞從動物或植物體內(nèi)取出,然后在適宜的人工環(huán)境中生長的過程。細(xì)胞可以在培養(yǎng)前直接從組織中取出并通過酶或機(jī)械方法進(jìn)行解離,也可以來源于已建立的細(xì)胞系或細(xì)胞株。
    原代培養(yǎng):
    原代培養(yǎng)是指細(xì)胞從組織中分離出來后,在適宜條件下增殖,直到它們占據(jù)所有可用的基質(zhì)(即達(dá)到匯合狀態(tài))的培養(yǎng)階段。在此階段,必須通過將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含有新鮮生長培養(yǎng)基的新容器中進(jìn)行繼代培養(yǎng)(即傳代),以為其提供更多的繼續(xù)生長空間。
    細(xì)胞系:
    第一次傳代培養(yǎng)后,原代培養(yǎng)物即被稱為細(xì)胞系。來自于原代培養(yǎng)的細(xì)胞系壽命有限(即:有限細(xì)胞系),隨著細(xì)胞的傳代,生長能力的細(xì)胞會占據(jù)優(yōu)勢,最終導(dǎo)致細(xì)胞群體在基因型和表型上達(dá)到一定程度的均一性。
    細(xì)胞株:
    如果通過克隆或其他方法從培養(yǎng)物中陽性篩選出了細(xì)胞系的亞群,則該細(xì)胞系成為一個細(xì)胞株。與親代細(xì)胞系起始時相比,細(xì)胞株通常會獲得一些其他的遺傳學(xué)改變。
    注意事項(xiàng):
    (1)無菌操作:細(xì)菌或霉菌污染是培養(yǎng)失敗的常見原因,必須加強(qiáng)各個環(huán)節(jié)的無菌操作觀念,以預(yù)防為主,一旦污染,一般很難消除。
    (2)培養(yǎng)液:所用的培養(yǎng)液必須滿足細(xì)胞生存和生長的必要條件。由于細(xì)胞來源的動物種類、組織類型不同,對培養(yǎng)液的要求有一定的差異,必要時可用預(yù)實(shí)驗(yàn)的方法選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液。
    (3)胎牛血清:胎牛血清對于維持培養(yǎng)細(xì)胞的生存和促進(jìn)細(xì)胞增殖起著關(guān)鍵性作用??蛇x擇多種不同批號的胎牛血清進(jìn)行小樣分析。一旦確定某一廠家的某一批號胎牛血清后,就保持應(yīng)用至實(shí)驗(yàn)完成。
    (4):必須新鮮配制,貯存時間過長(即使是-20℃低溫保存),也將影響消化效力,導(dǎo)致消化時間過長,細(xì)胞損傷增加。
    (5)L-幾乎所有細(xì)胞對有較高的要求,細(xì)胞需要核酸和蛋白質(zhì),在缺時,細(xì)胞會因生長不良而死亡。液中很不穩(wěn)定,加有養(yǎng)液在4℃冰箱貯存兩周以上時,就應(yīng)重新加入原來量的。
    (6)靜置培養(yǎng):原代細(xì)胞在消化分離后,置于CO2培養(yǎng)箱的頭24~48h (必要時72h)內(nèi),應(yīng)處于絕對靜置狀態(tài),切忌不時地取出培養(yǎng)瓶觀察生長狀況,這將使原代分離細(xì)胞難以貼壁,更談不上伸展和增殖,初學(xué)者尤應(yīng)注意。不必?fù)?dān)心培養(yǎng)液中的營養(yǎng)成分會消耗光,在細(xì)胞增殖之前對營養(yǎng)的要求并不大。原代培養(yǎng)初期僅加一薄層培養(yǎng)液的目的也在于有利于細(xì)胞貼壁伸展。
    (7)消化時間:一般消化至肉眼尚可見微小組織顆粒即可,因?yàn)榇藭r組織顆粒已經(jīng)松散,略經(jīng)吹打即成細(xì)胞團(tuán)或單個細(xì)胞,過久的消化往往導(dǎo)致細(xì)胞損傷加重,細(xì)胞培養(yǎng)成活率降低。
    (8)其他生長因子:經(jīng)過以上處理,一般原代分離細(xì)胞培養(yǎng)均可以成功。對于少數(shù)特殊類型細(xì)胞也可以考慮加一些特殊的生長因子,如胰島素能促使細(xì)胞攝取葡萄糖和氨基酸。另外,內(nèi)毒素、EGF、FGF等均有促有絲分裂作用,但費(fèi)用較高。
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