探針?lè)╭PCR試劑盒的特點(diǎn):
1、定量準(zhǔn)確、實(shí)驗(yàn)耗時(shí)短
從探針?lè)╭PCR原理可以看出,擴(kuò)增引物和探針序列都匹配后擴(kuò)增的產(chǎn)物才能產(chǎn)生熒光信號(hào),這樣就確保了熒光信號(hào)是目的片段的擴(kuò)增產(chǎn)生的,排除了非特異性擴(kuò)增的影響,特別是針對(duì)一些低拷貝和低濃度的樣品,檢測(cè)結(jié)果所見(jiàn)即所得,從而保證了檢測(cè)的準(zhǔn)確性。因探針?lè)╭PCR的高特異性,因此無(wú)需再設(shè)置熔解曲線檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物的特異性如何,有效縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
2、特異性高
在探針?lè)╭PCR中,除加入引物外還增加一條特異性探針,當(dāng)引物和探針都與靶基因結(jié)合時(shí),擴(kuò)增時(shí)探針才會(huì)被水解酶切發(fā)出熒光。當(dāng)引物發(fā)生非特異性擴(kuò)增時(shí),探針不會(huì)結(jié)合到非特異性片段上,因此不會(huì)被水解酶切而發(fā)出熒光,從而提高了特異性。
3、兼容多重反應(yīng)
在探針的5'端標(biāo)記不同的熒光修飾,則不同的探針在檢測(cè)過(guò)程中就會(huì)發(fā)出不同的熒光信號(hào)。根據(jù)此原理可以將檢測(cè)不同目的基因或者基因型的探針標(biāo)記不同的熒光修飾做混合檢測(cè),這樣就可以做多重檢測(cè),檢測(cè)對(duì)應(yīng)的熒光信號(hào)就是檢測(cè)對(duì)應(yīng)探針的熒光定量結(jié)果。多重檢測(cè)大大節(jié)省了檢測(cè)的物料試劑成本,也大大節(jié)省了檢測(cè)時(shí)間,進(jìn)一步提高了檢測(cè)的速度和適用性。
探針?lè)╭PCR試劑盒的實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2)客戶(hù)盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱(chēng)和ID號(hào);
3)客戶(hù)盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。