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    亮發(fā)光桿菌中蛋白質(zhì)的提取與純化技術(shù)

    點擊次數(shù):719  更新時間:2018-03-08

    亮發(fā)光桿菌實驗試劑 
    采用T7• Tag Affinity Purification Kit
    T7•Tag抗體瓊脂。B/W緩沖液:4.29mM Na2HPO4,1.47 mM KH2PO4,2.7 mM KCl, 0.137mM NaCl,1%吐溫-20,pH7.3 洗脫緩沖液: 0.1M檸檬酸,pH2.2. 中和緩沖液:2M Tris,pH10.4。 PEG 20000。
    實驗步驟
    1.100ml 含重組表達(dá)質(zhì)粒的菌體誘導(dǎo)后,離心5000g×5min,棄上清,收獲菌體,用10ml預(yù)冷的B/W緩沖液重懸。
    2. 重懸液于冰上超聲處理,直至樣品不再粘稠,4℃離心 14000g×30min,取上清液,0.45μm膜抽濾后作為樣品液。
    3. 將結(jié)合T7•Tag抗體的瓊脂充分懸起,平衡至室溫,裝入層析柱中。
    4. B/W緩沖液平衡后樣品液過柱。
    5. 10ml B/W緩沖液過柱,洗去未結(jié)合蛋白。
    6. 用5ml洗脫緩沖液過柱,每次1ml,洗脫液用含150μl中和緩沖液的離心管收集,混勻后置于冰上,直接SDS-PAGE分析。
    7. 將洗脫下來的蛋白放入透析袋中,雙蒸水透析24hr,中間換液數(shù)次。
    8. 用PEG 20000濃縮蛋白。
    亮發(fā)光桿菌注意事項
    蛋白在過層析柱前,要0.45μm膜抽濾,否則幾次純化后,柱子中會有不溶物。
    含量測定    100mg    100619-200501    那格列奈
    含量測定    50mg    100622-200401    鹽酸吉西他濱
    含量測定    100mg    100625-200301    多索茶堿
    HPLC法含量測定    100mg    100626- 200702     烏拉地爾
    HPLC法含量測定    100mg    100627-200401    比卡魯胺
    HPLC法含量測定    100mg    100628-200301    泛昔洛韋
    含量測定    50mg    100629-200301    替米沙坦
    亮發(fā)光桿菌

     

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